Gist two-hybrid

De gist two-hybridtechniek is gebaseerd op het feit dat een reportergen geactiveerd wordt door een DNA-bindingsproteïne die bestaat uit twee domeinen: één die het promotorgebied bindt en één die de transcriptie activeert. Normaal gebruikt men hiervoor het GAL4-eiwit.

Bij het two-hybridsysteem worden het bindings- en het activatiedomein van elkaar gescheiden en in aparte plasmiden gekloond. De constructie is zodanig uitgevoerd dat zowel aan het bindingsdomein als aan het activatiedomein een ander eiwitfragment kan worden gefusioneerd. Wanneer beide plasmiden in eenzelfde gist worden ingebracht, worden twee fusie-eiwitten aangemaakt. Wanneer deze fusie-eiwitten niet interageren, kan het bindingsdomein wel op het promotorgebied binden, maar het activeringsdomein wordt niet naar de promotor geleid en het reportergen wordt niet geactiveerd. Wanneer de fusie-eiwitten daarentegen wel kunnen interageren, wordt er een complex gevormd waarbij, bij binding van het bindingsdomein het activeringsdomein nu wel in staat is het reportergen aan te slaan.

Bron: Handboek procestechnieken en -engineering,  2000.